SUMOyliertes Bystin und acetyliertes HSP40 als spezifische BZR-Antigene des sporadischen, EBV-negativen Burkitt-Lymphoms

Abstract

Reaktivität von Burkitt-Lymphom B-Zell-Rezeptoren gegen sekundär-modifizierte Auotoantigene und daraus resultierende Wachstumsdynamiken: Die Grundlage dieser Arbeit bildet die Untersuchung von Burkitt-Lymphom B-Zell-Rezeptoren auf die Erkennung veränderter körpereigener Antigene, die möglicherweise über eine konstitutive BZell- Rezeptor-Signalgebung maßgeblich zur malignen Transformation von B-Zellen beitragen können. Um mögliche Zielantigene zu identifizieren, wurden im Voraus Zelllinien mittels eines inhouse modifizierten Macroarryas auf Bindung an körpereigene Antigene mit bestimmten posttranslationalen Modifikationen gescreent. Hier zeigte sich eine Bindung des BZR der Zelllinie CA46 gegen SUMOyliertes Bystin und der Zelllinie BL41 gegen acetyliertes HSP40. Zur Identifikation weiterer potenzieller Ziel-Antigene wurden ergänzend Dot Blots gegen inaktivierte Plasmodien-Lysate sowie Proteinarrayscreenings gegen verschiedene virale und bakterielle Antigene durchgeführt. Gegen diese ließ sich keine Reaktivität der untersuchten BZR nachweisen. Diese Arbeit widmete sich im Weiteren der Untersuchung von Burkitt-Lymphom Zelllinien und Patientenproben auf Bindung an die sekundärmodifizierten Antigene acetyliertes HSP40 und SUMO1-Bystin. Des Weiteren lag der Fokus auf der Analyse der Wachstumsdynamik der Burkitt- Lymphom Zellen CA46 und BL41 nach Zugabe ihres korrespondierenden Antigens und der Induktion einer möglichen Zytotoxizität durch Kopplung der Antigene an Pseudomonas aeruginosa Exotoxin- A (ETA). Die B-Zell-Rezeptoren (BZR) mehrerer Burkitt-Lymphom Zelllinien wurden kloniert und die Bindung der BZR von BL41 und CA46 an acetyliertes HSP40 bzw. SUMOyliertes Bystin im ELISA und Western Blot bestätigt. Weiterhin wurden Blutproben von Patienten mit diagnostiziertem Burkitt- Lymphom auf Antikörper untersucht. Hier ließ sich für einen von acht Patienten eine Reaktivität an SUMO1-BYS sowie für einen weiteren Patienten eine Reaktivität gegen acetyliertes HSP40 im ELISA nachweisen. Im Proliferationsassay konnte nach Zugabe der modifizierten Antigene zu den Zelllinien BL41 und CA46 ein deutlich zunehmendes Zellwachstum im Vergleich zur Anwesenheit der nicht-posttranslational-modifizierten Antigen-Isoform gezeigt werden. Nach Intein-vermittelter Kopplung der posttranslational modifizierten Antigene an das ETA-Toxin von Pseudomonas konnte im Proliferationsassay eine relevante Zytotoxizität beobachtet werden.

Reactivity of Burkitt's lymphoma B-cell receptors against secondary-modified auotoantigens and resulting growth dynamics: This work is based on the investigation of Burkitt lymphoma B-cell receptors for the recognition of altered endogenous antigens, which may contribute significantly to the malignant transformation of B cells via constitutive B-cell receptor signaling. To identify possible target antigens, cell lines were screened in advance using an in-house modified macroarray for binding to endogenous antigens with specific post-translational modifications. This revealed binding of the BCR of the CA46 cell line to SUMOylated bystine and of the BL41 cell line to acetylated HSP40. To identify further potential target antigens, dot blots against inactivated Plasmodium lysates and protein array screenings against various viral and bacterial antigens were also performed. No reactivity of the investigated BCRs was detected against these. This work also focused on the investigation of Burkitt lymphoma cell lines and patient samples for binding to the secondary modified antigens acetylated HSP40 and SUMO1-bystin. Furthermore, the focus was on analysing the growth dynamics of the Burkitt lymphoma cells CA46 and BL41 after addition of their corresponding antigen and the induction of possible cytotoxicity by coupling the antigens to Pseudomonas aeruginosa exotoxin A (ETA). The B-cell receptors (BCR) of several Burkitt lymphoma cell lines were cloned, and the binding of the BCR of BL41 and CA46 to acetylated HSP40 and SUMOylated bystine, respectively, was confirmed by ELISA and Western blot. Furthermore, blood samples from patients diagnosed with Burkitt lymphoma were tested for antibodies. Here, reactivity to SUMO1-BYS was detected in one of eight patients and reactivity to acetylated HSP40 was detected in another patient in ELISA. In the proliferation assay, the addition of the modified antigens to the BL41 and CA46 cell lines showed a significant increase in cell growth compared to the presence of the non-post-translationally modified antigen isoform. After inteinmediated coupling of the post-translationally modified antigens to the ETA toxin from Pseudomonas, relevant cytotoxicity was observed in the proliferation assay.